注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

土壤 N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)是溶酶体中的一种酸性水解酶，由土壤微生物分泌。在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能，S-NAG 活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理：

4-羟甲基-7-香豆素(MUB)在 365  nm 波长处激发,  能在 470  nm 处检测到荧光, 它与某些物质结合后荧光特性消失, 通过酶的水解作用 MUB 释放出来,  通过检测荧光量来表征酶活性。

自备仪器和用品：

多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 120mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。用前加 11 mL 蒸馏水充分溶解(可 50℃震荡溶解)。

试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30～50 目筛。按照土壤质量(g)：试剂一 mL)为 1：5～10 的比例(建议称取约 0.1g 土壤，加入 1mL 试剂一)，振荡混匀。

测定步骤：

1.  测定管：在震荡条件下取 100  μL 土壤悬液到 EP 管中，加入 100 μL 试剂二，30℃震荡避光培养 3 h，从中吸取 134  μL 到黑色不透光 96 孔板中，加入 66 μL 试剂三后用多功能酶标仪进行检测，激发光波长 365 nm，测定波长 470nm。

2.  对照管：取 100 μL 蒸馏水到 EP 管中，加入 100 μL 试剂二，30℃震荡避光培养 3 h， 从中吸取 134 μL 到黑色不透光 96 孔板中，加入 66  μL 试剂三后用多功能酶标仪进行检测，激发光波长 365 nm，测定波长 470nm。 ΔA=A 测定-A 对照

注意：对照管只需测定一次。

S-NAG 活性计算公式：

标准曲线：y = 62629x - 2266.4     R2 = 0.9996     x：MUB 标准品浓度(nmol/mL)

y：荧光强度酶活(nmol/h /g 土样)=(ΔA+2266.4)÷62629×V÷T÷W=(ΔA+2266.4)÷187887÷W

V：提取液体积，1 mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，3 h。