实验报告：

一、SHG-44(胶质瘤细胞)分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

ENAM (Enamelin) ELISA KITMonkey IFABP/FABP2(Intestinal Fatty Acid Binding Protein) ELISA Kit2-硝基苯基硼酸组织谷胱甘肽S转移酶（GSH ST）总活性比色法定量检测试剂盒

ENDOU (Poly(U)-specific endoribonuclease) ELISA KITMonkey IFN-α(Interferon Alpha) ELISA Kit2-硝基苯基硼酸血液谷胱甘肽S转移酶（GSH ST）总活性比色法定量检测试剂盒

EMCN (Endomucin) ELISA KITMonkey IFN-β(Interferon Beta) ELISA KitNα-对甲苯磺酰基-L-精氨酸甲酯盐酸盐微粒体谷胱甘肽S转移酶（GSH ST）活性比色法定量检测试剂盒

MAT2A(S-adenosylmethionine synthase isoform type-2) ELISA KitMonkey IFN-γ(Interferon Gamma) ELISA KitNα-对甲苯磺酰基-L-精氨酸甲酯盐酸盐胞浆谷胱甘肽S转移酶（GSH ST）活性比色法定量检测试剂盒

DUPD1 (Dual specificity phosphatase DUPD1) ELISA KITMonkey IgA(Immumoglobulin A) ELISA Kit氨基三亚甲基膦酸细胞谷胱甘肽还原酶活性比色法定量检测试剂盒

ENDOD1 (Endonuclease domain-containing 1 protein) ELISA KITMonkey IgE(Immunoglobulin E) ELISA Kit氟化镍血液谷胱甘肽还原酶活性比色法定量检测试剂盒

DNM1L (Dynamin-1-like protein) ELISA KITMonkey IGF-1(Insulin Like Growth Factor 1) ELISA KitN-乙酰-L-缬氨酸组织谷胱甘肽还原酶活性比色法定量检测试剂盒

DNAAF1 (Dynein assembly factor 1, axonemal) ELISA KITMonkey IgG(Immunoglobulin G) ELISA KitN-乙酰-L-缬氨酸酵母谷胱甘肽还原酶活性比色法定量检测试剂盒

PMF1 ELISA KitPSMC1/Proteasome 19S S4   26S蛋白酶调节亚型抗体三丁基膦大豆苷进口/国产Streptavidin/SA protein  链酶亲和抗体含量：HPLC≥98%

PMFBP1 ELISA KitZDHHC17/HIP14  NFκB激活蛋白205抗体3,4,5-三氯苯硼酸大豆苷元进口/国产Serum IgA  人血清型免疫球蛋白A抗体含量：HPLC≥98%

KRT6A(KeRatin, type II cytoskeletal 6A) ELISA KitFANK1  HSD13蛋白抗体3,4,5-三氯苯硼酸染料木进口/国产ETFA  电子转移黄蛋白α抗体含量：HPLC≥98%

PNMA2 ELISA KitDestrin 19/ADF  肌动蛋白解聚因子19抗体3,4,5-三氯苯硼酸染料木苷进口/国产γ-taxilin/LSR5  脂多糖相关反应蛋白5抗体含量：HPLC≥98%

PMFBP1 ELISA KitNeurotensin/NTS  神经紧张素抗体盐酸硫胺欧前胡进口/国产T4/L-Thyroxine  状T4抗体含量：HPLC≥98%

KRT6A(KeRatin, type II cytoskeletal 6A) ELISA KitNESG1/CCDC19  鼻咽上皮细胞特异性蛋白1抗体盐酸硫胺异欧前胡进口/国产HLA G(N-Terminus)  人类白细胞抗原G抗体（N端）含量：HPLC≥98%

PMF1 ELISA KitFOXL2  小睑裂综合征蛋白BPES抗体维生素B1/盐酸硫胺/维生素B1盐酸盐远志酸进口/国产HLA G(C-terminal)  人类白细胞抗原G抗体（C端）含量：HPLC≥99%

PLS1 ELISA KitXPC  DNA补充修复XPC细胞蛋白抗体2 - (二叔丁基膦)-3,6-二甲氧基-2''-4''-6''三- 1 -丙基- 1,1''-双苯基远志皂苷元进口/国产hemagglutinin protein/H  疹病血凝抗体含量：HPLC≥99%

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。