细胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA检测试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测方法。向预包被了抗体的微孔板中，加入标准品和待测样本，温育后，加入生物素标记抗体和过氧化物酶标记的链霉亲和素。经过温育和洗涤结合形成的免疫复合物，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子浓度呈正相关。最后，在450 nm处测定反应孔样品吸光度（OD）值，通过绘制标准曲线计算出样本待测因子的浓度。

血清、血浆、细胞培养上清液和组织等。

双抗夹心法。

CCND1；BCL1；D11S287E；PRAD1；U21B31；cyclin D1；G1/S-specific cyclin-D1；B-cell CLL/lymphoma 1；B-cell lymphoma 1 protein；BCL-1 oncogene；PRAD1 oncogene；细胞周期素D1(Cyclin-D1)；细胞周期素D1

试剂盒组分

    ELISA酶标板、标准品、生物素化抗体、浓缩HRP酶结合物、酶结合物稀释液、生物素化抗体稀释液、标准品&样品稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液(TMB)、反应终止液、封板覆膜

需自备物品

    1.酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) ；

    2.洗板机（可调注液量，保证每孔350μl洗液而不溢出）；

    3.高精度单道加液器；

    4.高精度多道加液器；

    5.37℃恒温箱；

    6.低温离心机；

    7.纯净水或蒸馏水。

操作步骤

    1.从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内封存于2-8℃；

    2.分别将标本或不同浓度的标准品加入相应孔中(100μl/孔)， 37℃孵箱孵育90分钟；

    3.弃掉板内液体，洗板2次；

    4.加入生物素化抗体工作液(100μl/孔)，37℃孵箱孵育60分钟；弃掉板内液体，洗板3次；

    5.除空白孔外，加入酶结合物工作液(100μl/孔)。37℃孵箱，避光孵育30分钟；弃掉板内液体，洗板5次

    6.加入TMB显色工作液（包括空白孔）100μl/孔，37℃孵箱，避光孵育，当标准曲线高浓度的颜色较深，有明显的颜色梯度的时候，即可终止。试验显色反应请勿超过30分钟；

    7.加入终止液（包括空白孔）100μl/孔，混匀后即刻测量OD（450nm）值(10分钟内)。

    8.计算标本待测因子含量。

注意事项

    1.试剂盒使用前请保存在2-8℃。除复溶后的标准品，其他成分不可冻结。

    2.浓缩生物素化抗体，浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000rpm离心1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。

    3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

    4.实验过程中，冻干标准品为一次性使用，不得分装。因其浓度较低，溶解两小时候后，会迅速失活。

    5.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

    6.配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，最好使用微量振荡器（使用最低频率），如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀。

    7.实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热。

    8.酶免实验中标准品和样本检测时建议作复孔。

    9.将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2-8℃保存。

    10.显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

    11.超过使用有效日期的试剂盒不能应用于实验中。

    12.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，波长应该设置为450nm和630nm.

    13.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全。

    14.各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

    15.每次试验测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔最高浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数。

    16.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

    17.以洗板机洗板时，每孔注液量不应少于350μl, 注意检查加样头是否堵塞。手工洗板时， 用带纸屑的吸水材料应慎重， 防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物与显色剂发生反应。

    18.用终止液终止反应后，请于10分钟内读取OD值。

    19.进行复孔实验时，结果计算一定要求平均值。

    20.标本溶血可能会有假阳性结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

    21.试验时，应该将加过样品的板条放于密闭盒内，并保持湿度约60%左右；

    22.为保证恒温箱内的温度为37℃，恒温箱的温度要经常校准。以确保实验温度保持恒定。    

精密度

    批间差:CV%<10%；批内差:CV%<8%

储存

    -20℃,短期4℃

有效期

    12个月