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γ-谷氨酰基转移酶(GGT)检测试剂盒(重氮微板法)
γ-谷氨酰基转移酶(GGT)检测试剂盒(重氮微板法)图片
产品介绍

L-γ-谷氨酰基转移酶(GGT或γ-GT)是催化γ-谷氨酰基移换反应的酶,γ-谷氨酰基从谷胱甘肽或其他含γ-谷氨酰基物质中转移到另一肽或氨基酸分子上,GGT主要存在于肝细胞膜和微粒体上,参与谷胱甘肽的代谢,血清中主要来自肝胆系统,当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时血清中 GGT往往容易增高。

γ-谷氨酰基转移酶(GGT)检测试剂盒(重氮微板法)以萘胺盐为底物,在 GGT催化下γ-谷氨酰基转移到甘肽分子上,同时释放出游离的α-萘胺,后者与重氮盐反应,产生红色化合物,其颜色深浅与 GGT浓度呈正比,通过酶标仪检测 530nm处吸光度,进而计算酶的活性。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成:

试剂(A):萘胺标准(1.5mmol/L)1ml4℃避光
试剂(B): GGT Assay Buffer5ml-20℃
试剂(C): GGT显色剂1支RT
试剂(D):显色稀释液30ml4℃避光
使用说明书1份

自备材料:

1、蒸馏水

2、离心管

3、水浴锅或恒温箱

4、 96孔板、酶标仪

操作步骤(仅供参考):

1、准备样品:

①血浆、血清样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于该试剂盒的测定,-20℃保存,用于 GGT的检测。

②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,-20℃保存,用于 GGT的检测。

③(选做)样品准备完毕后可以用 BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的 GGT含量。

2、配制 GGT显色工作液:取 GGT显色剂 1支,加蒸馏水 1ml,充分溶解,即为 GGT显色储存液,该 GGT显色储存液为过量(4℃保存,30天有效);临用前按 GGT显色储存液:显色稀释液=1:1000的比例混合,即为 GGT显色工作液,4℃保存,24h有效。

3、配制系列萘胺标准:取适量的萘胺标准(1.5mmol/L),按萘胺标准(1.5mmol/L):GGT Assay Buffer=1:9的比例混合,即为萘胺标准工作液-萘胺标准(0.15mmol/L),按下表配制系列标准品。

加入物(ml)012345
萘胺标准(0.15mmol/L)00.020.040.060.080.1
GGT Assay Buffer0.10.080.060.040.020
相当于 GGT(U/L)020406080100

4、 GGT酶促反应:取 96孔板,按照下表设置对照孔、标准孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品的酶活性过高,可减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

加入物(μl)标准孔对照孔测定孔
蒸馏水2
待测样品(如血清等)2
系列萘胺标准(1~5号)20
GGT Assay Buffer(37℃预温)2020
混匀,37℃准确孵育 15min。(标准孔不需要孵育)
GGT显色工作液200200200
待测样品(如血清等)2

5、GGT检测:混匀,室温放置 10min,以“0”号标准孔调零,样品测定以“对照孔”调零,酶标仪测定 530nm处标准孔、测定孔的吸光度。

计算:以标准孔活力单位(U/L)为横坐标,以吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,在标准曲线上查出待测样品的 GGT酶活力单位。

注意事项:

1、血清或 EDTA抗凝血检测效果较好,肝素钠、柠檬酸、草酸、氟化物等抗凝血会引起浑浊或者抑制酶活性(10~15%)。

2、尽量避免使用溶血样品。

3、GGT活力 20~100(U/L)颜色由淡紫红色到紫红色梯度变化。

4、本产品仅用于科研领域,不能用于临床诊断或其他用途。

有效期:6个月有效;4℃运输,4℃保存。

附录:标准曲线制作:Leagene在室温条件下按说明书操作,用酶标仪 540nm对系列标准进行吸光度的测定,其数值及标准曲线如下(仅供参考):

GGT(U/L)020406080100
吸光度0.0370.1540.2650.3700.4800.583

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