正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

γ-氨基丁酸(GABA)是一种天然活性成分，广泛分布于动植物体内。γ-氨基丁酸是中枢神经系统中有效的抑制性神经递质，具有降血压、增进脑活力、营养神经细胞、保持神经安定、 促进生长激素分泌和保肝利肾等作用，目前在医药和保健食品中已有广泛的应用。

测定原理：

苯酚和次氯酸钠与 GABA 反应，产生蓝绿色产物，在 640nm 有最大吸光值。

需自备的仪器和用品：

酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存；

试剂三：液体 8mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。

样品测定的准备：

称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液，充分匀浆，转移至 EP 管，95℃水浴 2h(盖紧，以防止水分散失)。冷却后 8000g  ，25℃离心 10min，取上清待测。

测定步骤

EP 管中加入如下试剂

混匀，室温静置 5min。

混匀，95℃水浴 10min，冰浴冷却。

混匀，取 200μL 于 96 孔板，测定 640nm 下吸光值 A 测定与 A 空白，ΔA=A 测定-A 空白，空白管只需测一管。

GABA 含量计算：

标准条件下测定回归方程为 y = 0.0265x - 0.0163，R2 = 0.9953；x 为标准品浓度(μmol/mL)，y 为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

GABA(μmol/mg prot)=(ΔA+0.0163)÷0.0265÷Cpr=37.74×(ΔA+0.0163)÷Cpr

2、按样本鲜重计算

GABA 含量(μmol/g  鲜重)=(ΔA+0.0163)÷0.0265÷W=37.74×(ΔA+0.0163)÷W Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。